反相液相色谱 液相色谱法   液相色谱 亿鑫仪器供 
 
 
  
 
食品中着色剂  液相色谱仪(HPLC)检测方案 
 
1　 仪器与试剂 
 
1.1 仪器　　
 
梯度  液相色谱仪，配紫外　　
 
色谱柱　C18 250mm×4.6mm×5μm　　
 
超声波水浴　　
 
分析天平（感量0.001g）　　
 
0.45μm水性滤膜 
 
1.2 试剂　　
 
  ，色谱纯。　　
 
   。　　
 
聚酰胺粉（尼龙6）：过200目筛　　
 
  ，色谱纯。　　
 
柠檬酸溶液：称取20克柠檬酸，加水至100mL，溶解混匀。　　
 
乙酸铵溶液（0.02mol/L）称取1.54克乙酸铵，加水至1000mL，溶解，经经0.45μm水性滤膜过滤。　　
 
无水乙醇-  -水（7+2+1）：量取无水乙醇70mL、  20mL、水10mL混匀。
 
合成着色剂标准液：准确称取按其纯度折算为    质量的柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、新红、赤藓红、亮蓝、靛蓝各0.100克，置于100mL容量瓶中，加pH=6水到刻度，配成水溶液。
 
 
 
2 　测定原理 
 
    食品中人工合成着色剂用聚酰胺吸附法或液液分配法提取，制成水溶液，注入  液相色谱仪，经反相色谱分离。 
 
 
 
3 　试样溶液的制备 
 
   称取试样5.000g-10.000g(  至0.0001g)，置于100ml烧杯中，加100ml水，用柠檬酸溶液调pH到6，加热至60度，将1克聚酰胺粉加少许水调成糊状，倒入试样溶液中，搅拌片刻，以G3垂融漏斗抽滤，用pH=4的水洗涤3-5次，然后用  -  混合溶液洗涤3-5次，再用水洗至中性，用乙醇-  -水混合溶液解吸3-5次，每次5mL，收集解吸液，加乙酸中和，蒸发至近干，加水溶解，定容至5mL。经0.45μm水性滤膜过滤，进  液相色谱仪测定。
 
 
 
4 　色谱条件 
 
色谱柱：C18　250mm×4.6mm×5μm；　　
 
流动相：以20mmol乙酸铵为流动相A，以  为流动相B，
 
按下表规定经行梯度洗脱；
 
时间（分钟）       流动相A（%）      流动相B 
 
   0             80             20
 
   5             65             35
 
   15            15             85
 
   17            2             98
 
   22            2             98             
 
   22.1           80             20
 
   30            80             20　　
 
流速：1.0mL/min；　　
 
温度：室温；　　
 
进样量：20μL；　　
 
检测波长：254nm